ГОУ ВПО
(КЕМЕРОВСКИЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ УНИВЕРСИТЕТ)
Биологический факультет
Кафедра генетики
Реферат для большого практикума по молекулярной
генетике и иммунохимии
Тема: Иммунологические методы, основанные
на взаимодействии антиген – антитело
Преподаватель
д.м.н. А.В. Шабалдин
Работу выполнила
ст. 5 курса
биологического факультета
Лунина А.А.
КЕМЕРОВО 2007
Содержание
Введение
1. Двойная радиальная иммунодиффузия по Ухтерлони
Принцип
Проведение иммунодиффузии
Оценка результатов
Возможно вы искали - Шпаргалка: Иммунотерапия
Определение титра
Область применения
2. Простая линейная иммунодиффузия по Удену
Принцип
Проведение иммунодиффузии
Похожий материал - Реферат: Индивидуальное развитие как новая стратегия эволюции
3. Простая радиальная иммунодиффузия по Манчини
Принцип
Проведение исследования
Оценка метода
4. Нефелометрия
Очень интересно - Реферат: Интегративные механизмы
Принцип метода
Проведение исследования
Оценка метода
5. Иммунодот и иммуноспот
6. Список литературы
Введение
Вам будет интересно - Реферат: Интеграция обмена углеводов, белков и жиров в организме. Транспортные системы в организме человека
В современное время широко используют методы, основанные на взаимодействии антиген – антитело. К данным методам относятся методы иммунодиффузии, нефелометрии, иммунодот и иммуноспот. Они широко используются для определения числа антигенов в различных жидкостях (сыворотке крови, цереброспинальной жидкости), для оценки чистоты препаратов при выделении антигенов, для сравнения известных антигенов и антител с неизвестными. Твердофазный иммуноферментный анализ является наиболее популярным методом в диагностике различных вирусных, бактериальных, грибковых и паразитарных болезней человека и животных.
1. Двойная радиальная иммунодиффузия по Ухтерлони
1.1. Принцип
В слое агарового геля равномерной толщины на определенном расстоянии друг от друга вырезают лунки для антигена и антисыворотки и заполняют их соответствующими растворами. После этого антигены и антитела диффундируют в гель, встречаются друг с другом и образуют иммунные комплексы, которые преципитируют в полях геля и становятся видимыми как линии преципитации.
1.2. Проведение иммунодиффузии
Расплавляют агар (1,5 г) на водяной бане в 100 мл одного из предлагаемых растворителей (0,15 М раствор NaCl, веронал-ацетатный буфер с pH 8,6 и ионной силой 0,1). Горячий агарозный гель разливают по 3 мл на предметные стекла, расположенные строго горизонтально.
Чтобы усилить сцепление геля с поверхностью стекла, предметные стекла рекомендуется покрыть агаровой пленкой. Для этого на стекло наносят 1%-ный водный агаровый золь и высушивают при 70°С.
В зависимости от задачи иммунохимического анализа для вырезания лунок в геля применяют либо специальные штампы разного профиля, либо инъекционные иглы, металлические или стеклянные трубочки с разными краями. Лунки для антигенов и антисыворотки располагают на расстоянии не менее 4 и не более 10 мм.
Похожий материал - Реферат: Интеллект животных
Заполнив лунки соответствующими растворами, пластинки помещают во влажную камеру. Иммунодиффузию можно проводить при 4, 20 и 37°С. Она длится не менее 24ч и может продолжаться до 6-7 дней. Образование новых линий преципитации следует наблюдать ежедневно. Продолжительность иммунодиффузии зависит от конкретной задачи исследования и от ряда других факторов. Результаты иммунодиффузии учитывают непосредственно на влажном препарате или сначала удаляют непреципитировавшие белки. Для этого препараты 2-3 раза погружают на 12 ч в ванночку с 0,15 М раствором NaCl, затем поверхность геля накрывают фильтровальной бумагой, смоченной в дистиллированной воде, и высушивают при комнатной температуре. Высушенные препараты окрашивают, например амидо-черным 10В, и учитывают результаты иммунодиффузии.
1.3. Оценка результатов
Число линий преципитации
У разных антигенов часто бывают сходные коэффициенты диффузии. Поэтому в многокомпонентных системах антиген-антитело в одном и том же участке геля могут появиться преципитаты разной специфичности, образующие одну линию преципитации. В других случаях концентрации антигенов и антител и их соотношения могут оказаться настолько неблагоприятными, что заметной преципитации просто не произойдет. Поэтому число видимых линий преципитации обычно меньше числа систем антиген-антитело и лишь в лучшем случае равно ему.
Расположение преципитатов между лунками